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抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的
中南数字出版网(www.zhipr.net)  核心期刊·推荐发表  全国最受欢迎的医学期刊网 时间:2013-07-20

  【摘 要】 目的 了解抗Ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎(RA)中的临床意义。方法 以改进的酶联免疫吸附法(ELISA)检测179例RA患者和171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性Ⅱ型胶原抗体水平。结果 RA患者抗天然和抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%,早期RA患者各为30.0%和36.7%。其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%,健康人二者均为2.5%。抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(P0.05)。抗变性Ⅱ型胶原抗体和抗天然Ⅱ型胶原抗体同时阳性RA患者的CRP平均水平较高。结论 抗天然Ⅱ型胶原抗体可以作为RA的一个辅助诊断指标。抗天然与抗变性Ⅱ型胶原抗体的检测有助于判断RA病情活动性。


  Anti-type Ⅱ collagen antibodies in rheumatoid arthritis

 


  【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of anti-type-Ⅱ-collagens antibody in rheumatoid arthritis (RA).Method Serum IgG antibodies to native and denatured type Ⅱ collagens (anti-nc Ⅱ and anti-dc Ⅱ) were detected in 179 patients with RA by an improved enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.Results In RA,the positive rates of anti-nc Ⅱ and anti-dc Ⅱ were 22.3% and 36.9%;in early RA were 30.0% and 36.7%,respectively.In other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.Anti-nc Ⅱ positive RA showed higher prevalence rate of RF and higher scores of patient′s global assessment of disease activity (P 0.05).The presence of anti-nc Ⅱ and anti-dc Ⅱ concomitantly was associated with high CRP level in RA patients.Conclusion Anti-nc Ⅱ could serve as a supplemental parameter in diagnosing RA and together with anti-dc Ⅱ may help evaluate the disease activity.


  【Key words】 Rheumatoid arthritis; Anti-type Ⅱ collagen antibody; Enzyme-linked immunosorbent assay; C-reactive protein


  抗Ⅱ型胶原抗体(antibodies to type Ⅱ collagen)与类风湿关节炎(RA)病情活动性、严重性的关系目前仍有争论。本研究参照Fujii等[1]提出的实验条件检测179例RA患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗Ⅱ型胶原抗体,探讨其在RA中的临床意义。结果报告如下。


  1 资料与方法


  1.1 一般资料


  1.1.1 病人组:为1994年9月至1999年3月在汕头大学医学院第一附属医院风湿科住院、门诊、随访的RA患者,共179例,全部符合1987年美国风湿病协会(ARA)的RA分类标准[2]。其中男性53例,女性126例,年龄17~76岁,平均46.3岁。其中病程1年之内,X线未出现明显骨质破坏者(以下简称早期病例)30例。


  1.1.2 对照组:共289例,分为两组:一组为同期在汕头大学医学院第一附属医院风湿科门诊或住院的非RA的其他风湿性疾病患者171例;另一组为正常对照组,共118名。


  1.2 抗Ⅱ型胶原抗体的体测


  参照Fujii等[1]的方法。


  1.2.1 微量反应板的包被及封闭:正常羊血清于62 ℃加热20 min,加入固体Tris (0.05 mol/L)、NaCl (0.15 mol/L)和2 mol/L HCl,调pH值至8备用(BNGS)。天然Ⅱ型胶原在46 ℃水浴中加热20 min,即为变性胶原。


  将天然Ⅱ型和变性Ⅱ型胶原分别溶解于0.05 mol/L的醋酸中,浓度为3 mg/ml。0.02 mol/L磷酸缓冲液(PB) pH 7.6稀释胶原溶液,使浓度为40 μg/ml,加入微量反应板孔,每孔100 μl,保鲜膜覆盖,4 ℃过夜。


  在与待检血清标本进行温育之前,包被好的微量反应板用含0.05%吐温-20的生理盐水溶液洗涤3次,然后每孔加入100 μl BNGS,室温(24~28 ℃)下封闭30 min,洗涤液洗涤3次。


  1.2.2 检测:BNGS稀释待检及阳性对照、阴性对照血清,转入微量反应板的微孔中,设二孔平行,每孔100 μl,同时设空白对照。室温温育2 h,生理盐水-吐温溶液洗涤3次。含25%BNGS的0.1 mol/L TBS pH 8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG,每反应 孔加入100 μl,室温温育2 h,洗涤。将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸-磷酸缓冲液pH 5.0中,使各自浓度分别为0.05%和0.017%,加入反应孔,每孔100 μl,37 ℃温育30 min后每孔加入终止液1.25 mol/L硫酸50 μl终止反应,酶标分光光度计492 nm处测吸光度(A)值。


  1.2.3 结果判断:以正常血清的平均A值加3个标准差作为正常值上限,待检血清A值超过者即被认为是阳性。


  1.3 统计学处理


  计量资料数据采用t检验,计数资料数据采用χ2检验。


  2 结果


  2.1 ELISA工作浓度的选择:为便于比较,选择工作浓度时以天然Ⅱ型胶原作为包被抗原,测定血清抗天然Ⅱ型胶原抗体水平。


  参照文献[3]的方法进行。结果表明,Ⅱ型胶原包被液浓度以40 μg/ml,第二抗体辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG稀释度以1∶400,血清以1∶40稀释为最佳。


  2.2 RA患者及对照组血清抗Ⅱ型胶原抗体检测结果:179例RA患者中,抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性者40例,阳性率22.3%,显著高于健康人和疾病对照组(3.5%和2.5%)(P<0.05);抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性者66例,阳性率36.9%,与正常对照组(2.5%)相比差异有极显著性(P<0.000 1),与其他风湿病(31.6%)差异不大。30例早期RA患者抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性9例,阳性率为30.0%。


  抗天然Ⅱ型胶原抗体对RA诊断的敏感性为22.3%,特异性为96.9%,抗变性Ⅱ型胶原抗体对RA诊断的敏感性为36.9%,特异性为80.3%。


  2.3 抗Ⅱ型胶原抗体与RA病情的关系:抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性患者RF阳性率高于阴性组(79.5%对61.8%,P=0.041),病情活动评分较高(8.5±9.5对6.6±1.5,P=0.027)。抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者血清CRP平均水平较阴性组高(24.8%对19.6%,P=0.003)。晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数、干燥综合征并发率、类风湿结节的发生率、功能分级二组间无统计学差异。IgG、IgM、IgA、γ-球蛋白,ESR水平、ANA阳性率及滴度、放射学病情进展及使用SAARDs的比例等方面在阳性组与阴性组无差异。抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性的早期RA患者ESR、CRP水平较阴性组增高(P<0.05)。


  27例抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者抗变性Ⅱ型胶原抗体同时阳性。本组病人RF检出率高于其他RA患者(P<0.05)。CRP水平也较高(19.6±17.5对16.8±16.0,P=0.007)。

 

  3 讨论


  抗Ⅱ型胶原抗体检测方法有多种,目前以ELISA法应用最为广泛。Fujii等[1]比较了吐温-20、牛血清白蛋白和一些动物血清(如兔、鸡、牛、羊)阻止人血清免疫球蛋白与酶标微量反应板的吸附作用后认为,与其他动物血清及吐温-20相比,兔和羊血清减少非特异性吸附作用效果最好。他用正常新鲜兔血清封闭酶标反应板,使RA病人与健康对照者血清的抗Ⅱ型胶原抗体滴度差异明朗化,并进一步提出该抗体可作为RA的一早期诊断指标[4]。我们虽未做多种动物血清封闭酶标反应板的比较,但通过采用Fujii等改进的ELISA检测血清抗Ⅱ型胶原抗体水平后我们发现,对照组抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性率甚低,使其对RA的诊断特异性达96.9%,在早期RA中敏感性略高于非早期RA患者,表明该抗体的检测可以作为对RA诊断的一个补充。


  本组RF检出率在抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者较阴性组高,且有统计学意义。与林冰等[5]所观察到的结果一致。国外的报道多认为抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性与RF检出率无关[6]。是否存在人种差异,有待进一步证实。


  CRP为一急性时相反应产物,其水平可作为判断RA活动性的一个指标。Morgan等[7]报道仅部分RA患者CRP与抗天然及抗变性Ⅱ型胶原抗体 水平相关。本组179例RA患者抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性者血清CRP平均水平明显高于阴性组,且有高度的统计学意义。抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性组患者CRP水平偏高。早期RA抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性患者ESR、CRP水平显著较阴性者为高,提示这组患者炎症活动似更为显著。


  Charriere等[8]研究认为,抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性与患者X线病情进展较慢、较轻有关。但林冰等[5]报道抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者关节X线分期较高,认为该组病人病情更重。我们的研究未发现抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性组与阴性组在放射学分期、Sharp评分上有统计意义的差别。


  在本研究中,RA患者抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性者抗变性Ⅱ型胶原抗体多呈阳性,单纯抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性者较少(占全部抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者的31.7%)。进一步分析抗天然和抗变性Ⅱ型胶原抗体与临床的关系发现,抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性与否对抗变性Ⅱ型胶原抗体与CRP水平的关系有影响:当抗天然Ⅱ型胶原抗体阴性时,抗变性Ⅱ型胶原抗体与CRP水平即无明显关系,表明抗天然Ⅱ型胶原抗体状况对活动性同样起着关键作用,检测抗Ⅱ型胶原抗体有助于对RA活动性的估计。


  参 考 文 献


  1,Fujii K,Tsuji M,Murota K,et al.An improved enzyme-linked immunosorbent assay of anti-collagen antibodies in human serum.J Immunol Methods,1989,124:63-70.


  2,Arnett FC,Edworthy SM,Bloch DA,et al.The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1988,31:315-324.


  3,马东来,张敏,许华林,等.类风湿关节炎患者血清Ⅱ型胶原抗体检测.中国实验临床免疫学杂志,1996,8:28-30.


  4,Fujii K,Tsuji M,Kitamura A,et al.The diagnostic significance of anti-type Ⅱ collagen antibody assay in rheumatoid arthritis.Int Orthop,1992,16:272-276.


  5,林冰,吴东海,张荣富,等.类风湿关节炎患者抗天然Ⅱ型胶原抗体的测定及临床意义.中国康复医学杂志,1997,12:170-172.


  6,Choi EK,Gateaby PA,McGill NW,et al.Autoantibodies to type Ⅱ collagen:occurrence in rheumatoid arthritis,other arthritides,autoimmune connective tissue diseases,and chronic inflammatory syndromes.Ann Rheum Dis,1988,47:313.


  7,Morgan K,Clague RB,Collins I,et& nbsp;al.A longitudinal study of anticollagen antibodies in patients with rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1989,32:139-145.


  8,Charriere G,Hartmann DJ,Vignon E,et al.Antibodies to types Ⅰ,Ⅱ,Ⅸ and Ⅺ collagen in the serum of patients with rheumatic diseases.Arthritis Rheum,1988,31:325-332.

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